研究實現(xiàn)油蠶遺傳大片段基因組刪除
來源:科學(xué)網(wǎng)
作者:科學(xué)網(wǎng)
時間:2012-11-28 09:45:40
來自西南大學(xué)家蠶基因組生物學(xué)國家重點實驗室的研究人員利用一種新型基因組編輯工具:TALE分析家蠶油蠶突變基因BmBlos2,首次在個體水平利用人工核酸酶實現(xiàn)可遺傳的大片段基因組刪除。相關(guān)成果公布在PloS One雜志上。
文章的通訊作者是西南大學(xué)家長江學(xué)者特聘教授夏慶友,第一作者為馬三垣,夏慶友教授為西南大學(xué)蠶學(xué)與生物技術(shù)學(xué)院院長,享受國務(wù)院政府津貼專家,亦是西南大學(xué)首位“長江學(xué)者”特聘教授。主要專業(yè)領(lǐng)域為蠶桑分子生物學(xué)、生物技術(shù)、基因組及生物信息學(xué),曾于2004年和2009年先后在Science雜志上公布家蠶基因組圖譜和家蠶遺傳變異圖譜。
TALE (Transcription Activator Like Effectors)——即轉(zhuǎn)錄激活因子樣效應(yīng)蛋白,是植物致病菌Xanthomonas通過III型分泌系統(tǒng)注入到宿主細胞內(nèi)的一種蛋白質(zhì)。這種蛋白的獨特之處在于它的DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域:該DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域不同于其他已知的DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域。它是由不同數(shù)量的重復(fù)單元組成,每一個重復(fù)單元特異識別一個DNA堿基對。大多數(shù)情況下每個重復(fù)單元由34個氨基酸組成。這34個氨基酸中除了第12,13位的氨基酸變化較大之外,其他氨基酸高度保守。這兩個不保守的氨基酸被命名為RVD(repeat variable diresidue)。每個重復(fù)序列中12,13位的氨基酸和識別的核苷酸種類有特殊的一一對應(yīng)關(guān)系。
由于TALE蛋白的特異DNA序列識別以及靈活的可組裝性,因此這種蛋白在分子生物學(xué)中的應(yīng)用具有巨大前景——科學(xué)家們可以設(shè)計組裝任意的TALE單元去識別目標(biāo)DNA雙螺旋序列。
在這篇文章中,研究人員就利用這種新技術(shù)對家蠶油蠶突變基因BmBlos2進行了敲除,同時總結(jié)和分析了基因敲除過程中的多種規(guī)律,為家蠶乃至整個昆蟲的基因組編輯提供了重要的參考。
除此之外,常規(guī)的基于TALEN的基因敲除是通過在基因組的某個位點實現(xiàn)定點破壞實現(xiàn)的,這種破壞一般都是少數(shù)幾個堿基的缺失、插入或突變。在遺傳操作中,往往需要大片段基因組的變異以實現(xiàn)基因簇刪除、多基因刪除、調(diào)控區(qū)域刪除、外源標(biāo)記基因刪除等特殊需求。為此,這篇文章還探索了利用TALEN實現(xiàn)可遺傳的大片段基因組刪除并獲得成功,這也是首次在個體水平利用人工核酸酶實現(xiàn)可遺傳的大片段基因組刪除。
家蠶是一種重要的經(jīng)濟昆蟲、文化載體和模式生物,其不但在蠶絲產(chǎn)業(yè)的發(fā)展和絲綢之路的文化傳播中做出了卓越的貢獻,在蠶絲纖維新材料、生物反應(yīng)器和模式生物中也逐漸凸顯出廣闊的應(yīng)用前景。
這項研究獲得的遺傳改造系統(tǒng)為剪切家蠶油蠶基因BmBlos2靶序列的轉(zhuǎn)錄激活子樣效應(yīng)因子核酸酶TALEN,其中TALEN能夠準(zhǔn)確識別結(jié)構(gòu)為T(Nn)A的靶序列,并在基因組中實現(xiàn)堿基的缺失、插入或替換,在基因組中實現(xiàn)對目的基因的編輯,這些基因組長片段刪除系統(tǒng)的制備方法和應(yīng)用有助于目的基因的遺傳改造,獲得豐富的遺傳資源。
關(guān)于TALEN的應(yīng)用,近期來自香港中文大學(xué)、中科院廣州生物醫(yī)藥與健康研究院等機構(gòu)的研究人員也成功利用這一技術(shù)在爪蟾胚胎中獲得了高效的靶向基因敲除。(來源:生物通)
(esilk.net聲明:本網(wǎng)登載此文旨在傳遞更多行業(yè)資訊,文章內(nèi)容僅供參考。)

